Õhekihikromatograafia on keemilise analüüsi meetod, mis põhineb statsionaarsena 0,1–0,5 mm paksuse sorbendikihi kasutamisel. TLC-meetodit saab kasutada erinevates valdkondades ja see võimaldab määrata väga erinevaid keemilisi ühendeid.
Meetodi põhimõte
Õhekihikromatograafia meetod sündis paberikromatograafiast ja esimesed katsed viidi läbi 19. sajandi 80ndatel. Selle analüüsi aktiivne kasutamine algas alles pärast 1938. aastat.
TLC tehnika hõlmab liikuvat faasi (eluent), statsionaarset faasi (sorbenti) ja analüüdi. Statsionaarne faas kantakse ja kinnitatakse spetsiaalsele plaadile. Plaat võib olla valmistatud klaasist, alumiiniumist või plastikust - need on korduvkasutatavad substraadid, mida tuleb pärast iga kasutamist põhjalikult pesta, kuivatada ja valmistada sorbendi pealekandmiseks. Samuti on võimalik kasutada paberplaate, mis pärast kasutamist utiliseeritakse.
Statsionaarse faasina kasutatakse kõige sagedamini silikageeli, kuid on võimalik kasutada muid sorbente, näiteks alumiiniumoksiidi. Selle või teise sorbendi kasutamisel tuleb tulemuse täpsuse saavutamiseks rangelt järgida tehnoloogiat, sest näiteks silikageel võib anda vale tulemuse, kui labori õhk on liiga niiske.
Liikuva faasina kasutatakse lahusteid, näiteks vett, äädikhapet, etanooli, atsetooni, benseeni. Lahustit tuleb valida vastutustundlikult, sest kromatograafia tulemus sõltub otseselt selle omadustest (viskoossus, tihedus, puhtus). Iga analüüsitava proovi jaoks valitakse eraldi lahusti.
Analüüs
Proov tuleb lahjendada lahuses. Kui täielikku lahustumist ei toimu ja lisandeid on liiga palju, saab proovi ekstraheerimisega puhastada.
Proovi võib plaadile lisada automaatselt või käsitsi. Automaatne pealekandmine kasutab mikropihustusmeetodit, kus iga proov pihustatakse substraadi sobivale alale. Käsitsi manustamiseks kasutatakse mikropipetti. Iga proovi jaoks pannakse plaadile pliiatsimärgid. Iga proov kantakse kapillaariga plaadile ühe joonega piisavas kauguses märkidest, et mitte reageerida plii süsinikuga.
Plaat asetatakse anumasse, mille põhja valatakse eluent. Tugi asetatakse ühe servaga anumasse kuni märgitud jooneni. Anum on tihedalt suletud, et vältida liikuva faasi aurustumist. Kapillaarjõudude mõjul hakkab eluent sorbendikihti ülespoole tõusma. Kui eluent jõuab teatud tasemeni, eemaldatakse plaat anumast ja kuivatatakse.
Kui soovitud ainel pole värvi, pole see substraadil nähtav. Seetõttu viiakse läbi visualiseerimine - plaadi töötlemine joodiauru või muude värvainetega.
Pärast sellist töötlemist hinnatakse tulemust. Sorbendile ilmuvad erineva intensiivsusega värvilised alad. Aine (või ainerühma) määramiseks võrreldakse värvilisi alasid, nende suurust, intensiivsust ja liikuvust võrdlusprooviga.
TLC-meetodit kasutatakse laialdaselt, kuna see on kiire, odav, täpne, intuitiivne, ei vaja keerukat varustust ja seda on lihtne tõlgendada.